PCR中突变构建三个末尾一样的融合基因,其它两个都顺利的构建完成了,测序也正确.问题就出在第三个上,

PCR中突变
构建三个末尾一样的融合基因,其它两个都顺利的构建完成了,测序也正确.问题就出在第三个上,已经完全重新PCR三次并构建测序,尾部引物地方总是有突变,而且突变的位点也不完全一致,谁能指教一下.
我的一些考虑
1.如果说是引物有问题的话,那么前两个构建的测序正确.（因此不能说引物有问题）
2.如果说使用的酶等有问题的话我在构建的时候已经全部更换了材料.
3.如果说测序有问题的话,同样一份样品我送了两家不同的测序公司测序,但两分报告一样.

参考答案

污染原因(一)标本间交叉污染:标本污染主要有收集标本的容器被污染,或标本放置时,由于密封不严溢于容器外,或容器外粘有标本而造成相互间交叉污染;标本核酸模板在提取过程中,由于吸样枪污染导致标本间污染;有些微生物...

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